鳙鱼过敏原小清蛋白基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
【作者】
王海燕
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李荔
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刘志刚
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邬玉兰
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陈家杰
【关键词】
鳙鱼
小清蛋白
过敏原
【摘要】目的克隆、表达与纯化鳙鱼(Aristichthys nobilis)过敏原小清蛋白,并检测免疫学活性。方法提取鳙鱼的总RNA,设计简并引物,采用RT-PCR方法扩增目的基因,克隆入T载体中进行测序和分析。将目的基因克隆到pET-28a(+)表达载体中于E.coli BL21(DE3)表达。通过Ni2+亲和层析,对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western-blotting)方法检测其IgE结合活性。结果获得了鳙鱼过敏原小清蛋白基因,该基因被GenBank收录,登陆号FJ013047。基因开放阅读框共330个碱基(包括终止密码子),编码109个氨基酸,相对分子质量为11 537。Western-blotting结果表明,纯化后的重组蛋白能与过敏性患者血清中的特异性IgE结合。结论成功克隆、表达、纯化鳙鱼过敏原小清蛋白,此重组蛋白具有良好的免疫原性。
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