转基因水稻中重组人乳铁蛋白的分离纯化及其抑菌活性研究
【作者】
吴景欢
[1] ;
杨丽琛
[1] ;
刘改革
[2] ;
宫照龙
[1] ;
刘继开
[3] ;
胡豫杰
[3] ;
郭云昌
[3] ;
朴建华
[1] ;
沈志成
[2] ;
杨晓光
[1]
【关键词】
转基因水稻
重组人乳铁蛋白
【摘要】目的研究从转基因水稻中分离纯化重组人乳铁蛋白(recombinant humanlactoferrin,rhLF),并检测其是否具有抑菌活性。方法通过饱和硫酸铵分级沉淀从转基因水稻中分离rhLF后,经CM Sepharose FF交换层析和Sephadex G25分子筛层析进一步纯化rhLF。采用微量肉汤稀释法检测不同浓度rhLF(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和5.00mg/ml)对鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特菌的抑制情况。结果通过分离和纯化成功获得纯度较高的rhLF(纯度约90%),经考马斯亮蓝染色,Western blot和质谱仪鉴定分析确定为rhLF,分子量约为79 kD。抑菌实验显示,5.00和4.00mg/ml rhLF对鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌有持久的抑制效果,2.00和1.00mg/ml rhLF在实验后期也表现出明显的抑菌作用,0.50mg/ml及以下浓度则没有抑菌效果。5.00和4.00mg/ml rhLF在18h内对蜡样芽孢菌表现出一定的抑制效果;5.00mg/ml rhLF对单增李斯特菌在18h内有抑制作用。结论从转基因水稻中可成功分离和纯化rhLF,纯化后蛋白仍具有明显的抑菌活性。
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