重组金黄色葡萄球菌肠毒素A的表达及鉴定
【作者】
王佳慧
[1] ;
李楠
[1] ;
沈青
[1,2] ;
韩春卉
[1] ;
张靖
[1] ;
江涛
[1] ;
李凤琴
[1]
【关键词】
重组金黄色葡萄球菌肠毒素A
【摘要】目的通过基因重组方式获得高纯度、高含量重组金黄色葡萄球菌肠毒素A(rSEA)。方法将金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因片段插入pET28a载体中,测序并正确鉴定后,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达目的蛋白。重组蛋白用Ni.NTAHis蛋白亲和柱纯化。结果SDS—PAGE结果表明成功表达了分子量约为30kD的重组蛋白,经Westernblot和小鼠生物学鉴定,表达产物为重组金黄色葡萄球菌肠毒素A,并且具有较好的免疫原性,为制备抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体及建立相应的免疫学检测方法奠定了基础。结论构建的rSEA表达载体稳定,可高效表达目的rSEA蛋白。
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