【摘要】目的建立敏感快速的检测猪肉中单核细胞增生李斯特茵的实时PCR方法。方法以hlya基因为靶标，建立并验证实时PCR法的特异性。选用单核细胞增生李斯特菌CMCC54004，制备不同浓度的纯菌液，用实时PCR进行检测，制作标准曲线并计算扩增效率。进行人工染菌实验，染茵量分别为每25g猪肉样本1．3×10 0、1．3×10^1、1．3×102、1．3×103、1．3×104、1．3×105和1．3×106 CFU。分别在增菌0、4、8、12、18、24、30、36和46h取1ml培养液，提取DNA进行实时PCR检测，并用PCR和传统方法进行检测，比较3种方法检测的敏感性和特异性。采集24份市售猪肉样本，用这3种方法进行检测，进一步比较三者的阳性检出率。结果建立的实时PCR法特异性好，对纯菌液的检出限为1．3×103CFU／ml。人工染茵样本增茵24h后，实时PCR检出限1．3CFU／25g，PCR及传统方法达到这一检出限需要增茵46h。根据增菌24h的检测结果，建立实时PCR样本标准曲线。24份猪肉样本，实时PCR检出17份阳性。阳性率70．83％（17／24），与PCR和传统方法的阳性率一致。根据所得的样本标准曲线，对检测样本进行定量分析，确定了阳性样本中初始含量菌。结论所建立的实时PCR具有快速简便、敏感特异等优点，整个操作可在27h内完成，适用于猪肉中单核细胞增生李斯特菌的快速定量检测。