利用 THP-1 细胞进行致敏物鉴定的方法验证
【作者】
赵雪铮
[1] ;
贾强
[1,2] ;
张峻
[1,2] ;
李雪
[1,2] ;
郑玉新
[1,2] ;
张艳淑
[1] ;
戴宇飞
[1]
【关键词】
化学致敏物THP-1细胞
细胞
【摘要】目的探讨建立以THP-1源性巨噬细胞为受试细胞,以细胞上清液中细胞因子表达改变为检测指标的体外检测化学物致敏性的试验方法。方法将人单核细胞株THP-1细胞用佛波酯(PMA,0.1μg/m1)诱导,使之转化为具有贴壁能力的THP-1巨噬细胞。选择5种已知的化学致敏物硫酸镍(NiSO。)、2,4.二硝基氯代苯(DNCB)、苯二胺(PPDA)、重铬酸钾(K2Cr20,)、异氰酸酯(TDI)和2种非化学致敏物十二烷基磺酸钠(SDS)、异丙醇(IPA)为受试物,检测不同浓度受试物处理细胞的不同时间点时细胞因子表达的变化。分别用ELISA法检测细胞培养上清IL-6、TNF-α的水平,用流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测IL-1β、IL-8细胞因子的表达水平。结果NiSO4、DNCB和K2Cr207作用6h,PPDA、TDI作用12h时,THP-1细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-8四种细胞因子的表达量最高。5种化学致敏物NiSO4、DNCB、K2Cr2O7、PPDA和TDI在最适时间点最适浓度刺激细胞分泌IL-6的水平分别为对照组的40、25、20、50和50倍,TNF-α水平为对照组的20、12、20、8和5倍,IL-1β水平为对照组的30、60、25、30和45倍,IL-8水平为对照组的15、12、15、12和7倍;非致敏物SDS与IPA处理组IL-6水平均有升高,其中SDS组升高最明显,约为空白对照组的20倍。TNF-α、IL-1β和IL-8表达水平无明显变化。结论利用THP-1巨噬细胞检测细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-8表达水平的试验方法可以有效区分化学致敏物与非致敏物,因此这3个指标可作为鉴别化学致敏物和非致敏物的有效参考指标。
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