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金属β内酰胺酶基因blaNDM重组酶聚合酶扩增方法的建立
【作者】 屠博文 赵莹 黎俊宏 杜强 毛旭建 唐宏兵 吉俊敏 韩晓冬 王昆
【关键词】 重组酶聚合酶扩增 金属β内酰胺酶基因blaNDM 现场检测技术 广泛耐药菌
【摘要】目的 建立一种基于重组酶聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)扩增方法金属β内酰胺酶基因blaNDM的快速检测方法,为广泛耐药菌基因类型的确定提供技术支持.方法 遵照重组酶聚合酶扩增引物和探针设计原则,以blaNDM基因特异性序列为靶基因,设计相应的RPA扩增引物和探针.取梯度稀释已知拷贝数的DNA模板和致病菌核酸样品进行各扩增体系的RPA扩增实验,分析扩增体系的敏感性、特异性和重复性特征以便筛选和评价blaNDM基因的RPA扩增体系.结果 3组扩增体系的引物和探针能够有效的扩增靶基因,检出限达到2×102 copys/反应,与其他细菌样品无非特异性扩增反应,能够在2～7 min内实现靶基因有效扩增.结论 建立了金属β内酰胺酶基因blaNDM的重组酶聚合酶扩增体系,该反应迅速,检出限较低,具有较高的特异性,适用于耐药菌的现场检测.
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