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p53 在苯并[a]芘诱导所致 p21 和细胞周期蛋白改变中的作用

【作者】 张夏男 ; 李跃纲 ; 贾效伟 ; 刘秉慈 ; 叶萌

【关键词】 苯并 芘 p53 细胞周期调

摘要】目的探讨在苯并[a]芘(B[a]P)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白对p21、cyclinD1和CDK4蛋白间相互作用的影响。方法向转染p53小干扰RNA(p53siRNA)质粒的HELF细胞即p53.H细胞组、载体CMV的HELF细胞即HELF/CMV细胞组中分别加入2ixmol/LB[a]P作用24h,向p53化学抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)组即HELF/CMV+PFT.Ot细胞组中同时加入2μmol/LB[a]P和20μmol/LPFT-α作用24h,各组同时设立不做任何处理的对照组。用免疫印迹(Westernblot)法检测细胞中p53、p53-ser20以及p21、cyclinD1和CDK4蛋白水平的变化,同时利用免疫沉淀方法分析p53蛋白对p21、cyclinD1以及CDK4蛋白间相互作用的影响。结果利用PFT-α或p53siRNA技术抑制p53蛋白后,B[a]P诱导的p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平和p21蛋白水平的增高受抑制,B[a]P诱导的cyclinD1水平的增加不受影响,CDK4的水平不受B[a]P的影响;免疫沉淀实验结果表明,B[a]P引起的p21和CDK4结合的增加受到抑制,B[a]P引起的p21与cyclinD1结合的增加不受影响,cyclinD1和CDK4的结合不受B[a]P的影响。结论B[a]P通过p53-ser20影响人胚肺成纤维细胞p21和CDK4的结合。

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