慢病毒介导shRNA靶向下调过氧化物酶体增殖物激活受体α对全氟十二烷酸致大鼠肝细胞BRL 3A氧化损伤的影响

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【作者】王力程静静王广胤刘芳芳余丽丽刘辉

【关键词】大鼠; 过氧化物酶体增殖物激活受体α; 慢病毒; 活性氧簇; 全氟十二烷酸; 环境毒理; 肝脏损伤;

【摘要】目的通过观察慢病毒介导shRNA靶向下调大鼠肝细胞BRL 3A中过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR）α的表达,研究PPARα在全氟十二烷酸（perfluorododecanoic acid,PFDoA）致大鼠肝脏氧化损伤中的作用。方法构建PPARα慢病毒兼容shRNA干扰载体Lenti-iPα和阴性对照载体Lenti-NC,与慢病毒包装辅助质粒共转染293FT细胞进行慢病毒包装,收集慢病毒原液后浓缩并测定病毒滴度。分为NC-组（加阴性对照病毒,不加PFDoA）、NC+组（加阴性对照病毒,加75μmol/L PFDoA）、iPα-组（加干扰病毒,不加PFDoA）、iPα+组（加干扰病毒,加75μmol/L PFDoA）。使用慢病毒处理大鼠肝BRL 3A细胞96 h,最后24 h再对NC+组、iPα+进行75μmol/L PFDoA暴露。观察BRL 3A细胞中PPARα的干扰情况及PPARα的表达在PFDoA引起活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）变化中所起的作用。结果慢病毒介导shRNA成功实现靶向下调PPARα的表达,与NC-组相比,iPα-组的大鼠肝细胞系BRL 3A中ROS平均荧光强度为12043.42±808.58,显著升高（P<0.05）;PPARα下游靶蛋白酰基辅酶A硫酯酶（acyl-CoA thioesterases,Acot）1的基因和蛋白表达水平（分别为0.43±0.04和0.34±0.08）均显著下降（P<0.05）。PFDoA处理后,与NC+组相比,iPα+组大鼠肝细胞BRL 3A中ROS平均荧光强度为12386.25±356.36,显著上升（P<0.05）;Acot1的基因和蛋白表达水平（分别为0.85±0.10和0.33±0.04）显著下降（P<0.05）。结论 PPARα及其下游靶蛋白Acot1在大鼠肝细胞系BRL 3A中可能起到清除ROS的作用,避免外源物质对肝脏的氧化损伤。

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